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    脂質(zhì)過(guò)氧化探針C11-BODIPY 581/591

    簡(jiǎn)要描述:本產(chǎn)品是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過(guò)氧化探針,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對細胞內和細胞膜中的脂質(zhì)過(guò)氧化(Lipid ROS)進(jìn)行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會(huì )離開(kāi)脂質(zhì)膜,該過(guò)程同時(shí)伴隨熒光信號變化。

    • 產(chǎn)品型號:
    • 廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
    • 更新時(shí)間:2024-01-30
    • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:611

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    詳細介紹

    品牌BIOHUB分子量504
    貨號78EA10007供貨周期一周
    應用領(lǐng)域化工

    產(chǎn)品描述一、 化學(xué)結構:二、 檢測原理:本產(chǎn)品是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過(guò)氧化探針,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對細胞內和細胞膜中的脂質(zhì)過(guò)氧化(Lipid ROS)進(jìn)行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會(huì )離開(kāi)脂質(zhì)膜,該過(guò)程同時(shí)伴隨熒光信號變化。多用于熒光顯微鏡、流式細胞分析等對 Lipid ROS 的可視化監測。本產(chǎn)品 結構中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其熒光發(fā)射峰從 590 nm偏移至 510 nm。實(shí)驗步驟

    1. 樣品溶解:

    商品開(kāi)封后,離心機輕甩;隨后加入適量 DMSO 進(jìn)行溶解,溶解度至少可達 25mg/mL。溶解后建議分裝-20℃避光保存,盡量避免反復凍融,防止吸潮。

    【注】:樣品輕甩目的是為了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。

    2. 樣品使用:

    1流式細胞分析:

    懸浮細胞:800 g 離心 5 min 收集細胞沉淀;隨后 PBS 洗滌細胞兩遍。

    貼壁細胞:棄培養液,用常溫 PBS 或培養液輕洗細胞 2 次,隨后消化,800g 離心 5 min 收集細胞沉淀,隨后 PBS 洗滌細胞兩遍,每個(gè)樣本收集 1~5 ×105 個(gè)細胞。(注意:操作過(guò)程中輕柔吹打細胞, 消化時(shí)間不宜過(guò)長(cháng),劇烈吹打或消化過(guò)度會(huì )影響實(shí)驗結果)

    本產(chǎn)品 用于脂質(zhì)過(guò)氧化檢測的推薦濃度為終濃度 5μM;配制方法:用新鮮空白培養液配制終濃度為 5μM 本產(chǎn)品染色液待用,DMSO 含量5‰。

    (注意:該步操作建議在消化細胞前準備好,以免細胞消化后久置影響實(shí)驗結果)

    將事先配置好的脂質(zhì)過(guò)氧化染色液加入收集的細胞沉淀中,推薦體積為 500μL,隨后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期間 5-10min 間隔輕彈細胞使其懸浮保證染色更充分。

    染色結束后,800 g 離心 5 min,棄上清,隨后用PBS 清洗細胞 2 次,加入 200μLPBS 重懸細胞用于流式分析。

    2) 原位成像:

    接種適當密度的細胞于 20mm 規格的蓋玻片上也可用共聚焦小皿替代,給予實(shí)驗藥物處理適當時(shí)間后,吸去培養液,用 PBS 洗滌細胞一遍加入 500 μL 配制好的脂質(zhì)過(guò)氧化染色液,于 37℃染色 30min;(配制方法參考流式分析中的染色液配制)棄培養液,PBS 洗滌細胞兩遍后熒光顯微鏡或激光共聚焦下進(jìn)行成像檢測。細胞在染色后應在 1 h 之內完成檢測。

     

    3)檢測條件:該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長(cháng)為 581 nm, 發(fā)射為 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長(cháng)為 500 nm,發(fā)射在 510nm。因此,在流式分析中檢測通道為 FL1-A;激光共聚焦檢測:氧化態(tài)激發(fā)波長(cháng)可488nmFITC)通道;還原態(tài)激發(fā)波長(cháng)可選 561 nmTRITC)通道。

     

    實(shí)驗案例分析流式分析實(shí)驗范例:使用本試劑檢測 10 μM RSL3(鐵死亡經(jīng)典誘導劑)處理 A549 細胞 24 h 后的細胞脂質(zhì)過(guò)氧化水平的流式檢測 

    原位成像實(shí)驗范例:

    下圖為 RSL310 μM)處理A549 細胞 24 h 后,使用本試劑(5μM)對活細胞中脂質(zhì)過(guò)氧化水平進(jìn)行原位染色后激光共聚焦成像結果。

     



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