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    Collagenase IV膠原酶IV型

    簡(jiǎn)要描述:膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內切酶,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現在膠原中,很少發(fā)現于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘an酸(Gly)之間的肽鍵。

    • 產(chǎn)品型號:
    • 廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
    • 更新時(shí)間:2023-10-27
    • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:1535

    詳細介紹

    品牌BIOHUB供貨周期一個(gè)月
    應用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

    產(chǎn)品描述

    膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內切酶,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現在膠原中,很少發(fā)現于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘an酸(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,但膠原酶是唯yi一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結締組織內。

    本品來(lái)源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有膠原酶(更準確的稱(chēng)法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分別能夠有效水解結締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內的其他蛋白,多糖和脂質(zhì),使得本品非常適用于組織消化。

    目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的差異,分為四種類(lèi)型:膠原酶I型,II型,III型和IV型,在應用上有所偏向:

    1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、yi蛋白酶活性)。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備;

    2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來(lái)源細胞的制備;

    3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,常用于乳腺細胞的制備;

    4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低yi酶活性,通常用于胰島細胞的制備,或者需要維持受體完整性的細胞制備實(shí)驗。

    本品為IV型膠原酶,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),特別適用于胰島組織的消化。

    酶活力單位定義

    37℃,pH7.5 的條件下,5h內水解膠原產(chǎn)生相當于1µM L-亮an酸的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。

    運輸及保存條件

    室溫運輸。4避光保存,2年有效。儲存液-20避光凍存。

    使用方法

    1. 膠原酶儲存液的配制

    向每管100 mg的膠原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+HBSS(Hank’s平heng鹽溶液,含Ca2+、Mg2+),輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,制備成1g/mL(即1000×)的儲存液。然后用低蛋白結合性的0.22 μm的濾膜過(guò)濾除菌,分裝成小份量,然后于-20 °C避光凍存。

    使用前于冰上解凍,避免反復凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度為:0.5-2.5 mg/mL,用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL,需要根據特定的實(shí)驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的最佳工作濃度。

    2.組織的分離

    1. 使用無(wú)菌手術(shù)dao或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊;

    2. 利用含Ca2+、Mg2+HBSS洗滌組織塊數次;

    3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+HBSS,使其浸沒(méi)組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度;

    4. 于37℃孵育4-18 h。消化時(shí)使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。

    5. 已分散開(kāi)的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,收集備用。未wan全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續孵育;

    6. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次;

    7. 細胞培養液重懸上述細胞,利用自動(dòng)細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。

    8. 于細胞培養皿上利用合適細胞培養基接種細胞。

    3. 器官灌注

    1. 向37℃預熱的含Ca2+、Mg2+HBSS中加入膠原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率;

    2. 按照已優(yōu)化的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液;

    3. 將上述過(guò)程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開(kāi)來(lái),未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育;

    4. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次;

    5. 細胞培養液重懸上述細胞,利用自動(dòng)細胞計數器或其他方法計算活細胞密度。

    6. 于細胞培養皿上利用合適細胞培養基接種細胞。

    注意事項

           1. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

    2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。


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